? 病理技術(shù)作為病理學(xué)科的支撐，是病理診斷的基礎(chǔ)。病理技術(shù)是病理工作中的重要組成部分，它貫穿從接收標(biāo)本到發(fā)放病理報告整個診斷流程的始終。病理技術(shù)工作的質(zhì)量直接影響到患者的診斷治療效果,因此高質(zhì)量的病理技術(shù)工作就顯得尤為重要。其中的關(guān)鍵是組織的處理，組織處理的好壞，直接決定了之后無論是常規(guī)HE染色還是免疫組化、原位雜交還是基因檢測的可靠性和準(zhǔn)確性。因此組織的固定顯得及其重要，良好的固定是制作一張優(yōu)良病理切片的先決條件，組織固定的好壞在制片操作中無法糾正，固定是組織處理最重要的一步。為什么要固定呢？固定是在組織離體后，用各種辦法使其細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)盡可能的接近其生活狀態(tài)時的形態(tài)結(jié)構(gòu)和位置的過程。

組織固定的目的

? 1. 迅速防止組織、細(xì)胞的死后變化，防止組織自溶和腐敗，以保持組織和細(xì)胞與正常生活時的形態(tài)相似；

? 2. 細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等各種成分轉(zhuǎn)變成不溶性物質(zhì)，以保持它原有的結(jié)構(gòu)與生活時相仿；

? 3. 使組織中的各種物質(zhì)沉淀和凝固起來而產(chǎn)生不同的折射率，造成光學(xué)上的差異，以便染色后易于鑒別和觀察；

? 4. 固定劑兼有硬化作用，使組織硬化，增加組織硬度，便于制片；

? 5. 防止細(xì)胞過度收縮或膨脹而失去其原有形態(tài)結(jié)構(gòu)；

? 6. 經(jīng)過固定的組織，能對染料產(chǎn)生不同的親和力而著色清晰，便于辨認(rèn)。

固定的注意事項

? 1.固定必須及時組織離體后,必須立即固定(在30分鐘內(nèi))。

? 2.固定液的選擇固定液的選擇非常重要,應(yīng)該根據(jù)制作要求選擇合適的固定液。最常用的固定液是4%甲醛液或4%中性緩沖甲醛液。

? 3.固定液的量必須大于組織體積的4—10倍。

? 4.固定液的濃度固定液的濃度必須準(zhǔn)確,過稀或過濃都會影響組織的形態(tài)和固定效果。

? 5.固定液的質(zhì)量要注意固定液的有效期。發(fā)現(xiàn)固定液變質(zhì),如甲醛液體產(chǎn)生白色沉淀,應(yīng)立即更換。

? 6.固定的溫度室溫或放于35—37℃的全封閉組織處理機(jī)內(nèi)。溫度過高,會加快組織的自溶和組織的過度收縮,并破壞細(xì)胞內(nèi)的抗原。

? 7.固定的時間新鮮標(biāo)本,應(yīng)該剖開固定12—24小時后再取材。大標(biāo)本取材后在室溫下需再固定4—6小時。小標(biāo)本取材后應(yīng)該在室溫下再固定3—4小時；如果是新鮮小標(biāo)本取材,必須再固定4—8小時。如果室內(nèi)溫度過低,固定時間還需延長。需要做免疫組化或分子病理的標(biāo)本,從標(biāo)本離體至組織脫水開始,總固定時間一般不要超過48小時,但也不要少于24小時(厚度2—3m)。

? 盡管固定液有好多種，但最常用的固定液為10%中性福爾馬林(甲醛)。福爾馬林滲透性強(qiáng)，固定均勻，組織收縮小，但經(jīng)酒精脫水后收縮較大。甲醛不能使白蛋白和核蛋白沉淀，甲醛通過使蛋白質(zhì)分子發(fā)生交聯(lián)而產(chǎn)生固定作用。由于10%中性福爾馬林受到福爾馬林的質(zhì)量、使用時的揮發(fā)和取材時帶入水分的影響,濃度容易被降低，導(dǎo)致組織固定不足；而高濃度的福爾馬林,降低了對組織的穿透性，形成周圍固定好而中央固定不到的現(xiàn)象。所以可以適當(dāng)增加福爾馬林的濃度，以12%左右為佳。10%中性緩沖福爾馬林是滲透組織最快的試劑，但也是固定最慢的試劑，因此我們要深入認(rèn)識它、利用它。甲醛的作用分三個階段，分別是滲透、結(jié)合、交聯(lián)，這三個階段甲醛的作用速度分別為快、中、慢，可見甲醛對組織的固定作用并不是與滲透同時進(jìn)行的（滲透到不等于固定好），只有交聯(lián)好才算固定好。

? 由于固定用時較長，這也是導(dǎo)致病理報告周期較長的原因之一。

? 固定是病理制片過程中最重要的一步，因為這是不可逆的，也就是無法補(bǔ)救的。由于組織固定不佳，會造成組織腐爛、抗原丟失，將影響切片質(zhì)量，也將導(dǎo)致診斷困難或無法診斷，甚至影響免疫組化及基因檢測結(jié)果準(zhǔn)確性， 因此規(guī)范、合理的標(biāo)本管理非常重要。